醫(yī)院PCR實驗室進行設(shè)計發(fā)展要求:
試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
試驗區(qū)的主要操作是儲存試劑的制備、試劑的包裝和主要反應(yīng)混合物的制備。手術(shù)室層流凈化坐南朝北,位于建筑的較高處,以保持空氣潔凈、防止院內(nèi)感染為原則,地面、墻壁可以沖洗。要三區(qū)劃分合理:即有非限制區(qū)、半限制區(qū)、限制區(qū)。要有三通道:即工作人員通道、病人出入通道、污物出口通道。材料應(yīng)防火、耐濕、不易著色,以具有易于清潔等性能的材料為宜?,F(xiàn)代化手術(shù)室應(yīng)設(shè)計有:空氣凈化裝置、中心供氧、中心吸引等裝置。長沙凈化公司創(chuàng)造潔凈手術(shù)室的一種設(shè)備,無論它多么先進,但亦非"萬能";因?qū)恿飨到y(tǒng)并無消毒滅菌之功效,層流手術(shù)室其"無菌"環(huán)境主要是通過空氣的"過濾"、"層流"以及室內(nèi)維持"正壓"狀態(tài)來維持的。凈化手術(shù)室為病人提供手術(shù)及搶救的場所,是醫(yī)院的重要技術(shù)部門。手術(shù)室應(yīng)與手術(shù)科室相接連,還要與血庫、監(jiān)護室、麻醉復(fù)蘇室等臨近。抓好手術(shù)切口感染四條途徑的環(huán)節(jié)管理,即:手術(shù)室的空氣;手術(shù)所需的物品;醫(yī)生護士的手指及病人的皮膚,防止感染,確保手術(shù)成功率。用于樣品制備的試劑和材料應(yīng)直接送到該區(qū)域,不得通過其他區(qū)域。試劑原料必須儲存在該區(qū)域,并準(zhǔn)備成所需的儲存試劑。
在這方面對氣流壓力的控制沒有嚴(yán)格要求。
標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域發(fā)展主要問題進行的操作為中國臨床研究標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存技術(shù)及其企業(yè)加入至擴增以及反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。
該區(qū)域的氣壓梯度必須相對于鄰近區(qū)域為正,以避免氣溶膠污染物從鄰近區(qū)域進入該區(qū)域。此外,由于在取樣工作期間可能會出現(xiàn)氣溶膠污染,因此應(yīng)避免在該區(qū)域內(nèi)進行不必要的移動。
擴增進行反應(yīng)形成混合物配制和擴增區(qū)
在該區(qū)域進行的主要操作是DNA或cDNA擴增。 此外,也可以在該區(qū)域中進行添加所制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣品制備區(qū))以及將主反應(yīng)混合物(來自試劑儲存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合物等。 在巢式PCR測定中,通常需要在第一次擴增之后打開反應(yīng)管,因此巢式擴增具有高的污染風(fēng)險,并且必須在該區(qū)域中進行第二次取樣。
該區(qū)域的壓力梯度要求有一個相對于鄰近區(qū)域的負(fù)壓,以避免氣溶膠從該區(qū)域泄漏。為避免氣溶膠造成的污染,應(yīng)盡量減少在該區(qū)域不必要的行走。應(yīng)在超凈化臺中進行額外取樣等單獨操作。
擴增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設(shè)。
本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。